Ontogeny of digestive enzymes in larvae of the Clown Anemonefish, Amphiprion ocellaris (Perciformes: Pomacentridae)

Introduction: The Clown anemonefish (Amphiprion ocellaris) is the most popular fish species in the marine aquarium trade; however, there is a lack of information on their digestive physiology during larval ontogeny, valuable information needed for diet design and management protocols. Objective: To characterize the early digestive enzymes of A. ocellaris larvae. Methods: We used three pools (10 larvae each) and extracted 10 samples per tank, from just before hatching to the 38th day. We analyzed the specific activity of acid and alkaline proteases, trypsin, chymotrypsin, leucine aminopeptidase and lipase; and did acid and alkaline protease zymograms. Results: We detected all measured enzymes at hatching. Acid proteases increased in activity until the 38th day. Alkaline proteases, trypsin, chymotrypsin, and leucine aminopeptidase had the same pattern, and maximum activity on the 8th day, decreasing at the 38th day. Lipase activity peaked on the 8th and 30th day. The acid zymogram had a single band, appearing on the 8th day. A total of eight alkaline proteases were revealed (154.2, 128.1, 104.0, 59.8, 53.5, 41.9, 36.5 and 25.1 KDa), with seven bands on the 1st day and all bands from the 3rd to 8th day, decreasing at two bands (41.9 and 25.1 KDa) in the 38th day. Conclusion: A. ocellaris has a functional stomach on the 8th day, and, on the 38th day, a digestive omnivore pattern with a tendency to carnivory.

Introducción: El pez payaso (Amphiprion ocellaris) es la especie de pez más popular en el comercio de acuarios marinos; sin embargo, falta información sobre su fisiología digestiva durante la ontogenia larval, información valiosa necesaria para protocolos de diseño y manejo dietético. Objetivo: Caracterizar las enzimas digestivas tempranas de larvas de A. ocellaris. Métodos: Usamos tres homogenados (con 10 larvas cada uno) y extrajimos 10 muestras por tanque, justo antes de la eclosión hasta el día 38. Analizamos la actividad específica de proteasas ácidas y alcalinas, tripsina, quimotripsina, leucina aminopeptidasa y lipasa; e hicimos zimogramas de proteasas ácidas y alcalinas. Resultados: Detectamos todas las enzimas medidas en la eclosión. La actividad de proteasas ácidas incrementó hasta el día 38. Proteasas alcalinas, tripsina, quimotripsina, y leucina aminopeptidasa tuvieron el mismo patrón, con actividad máxima en el octavo día, decreciendo en el día 38. Hubo picos en la actividad lipasa a los ocho y 30 días. El zimograma ácido tuvo una banda única, apareciendo al octavo día. Se hallaron ocho proteasas alcalinas (154.2, 128.1, 104.0, 59.8, 53.5, 41.9, 36.5 y 25.1 KDa), con siete bandas al primer día, y todas las bandas entre el tercer y octavo día, bajando a dos bandas (41.9 y 25.1 KDa) al día 38. Conclusión: A. ocellaris tiene un estómago funcional al octavo día, y, al día 38, un patrón digestivo omnívoro con tendencias carnívoras.

Desarrollo osteológico de la columna vertebral y del complejo caudal de larvas de Lutjanus guttatus (Perciformes: Lutjanidae) en condiciones de cultivo / Osteological development of the vertebral column and caudal complex of Lutjanus guttatus (Perciformes: Lutjanidae) larvae under rearing conditions

The spotted rose snapper (Lutjanus guttatus) is an important commercial species in Mexico with good culture potential. The osteological study at early stages in this species is an important tool to confirm normal bone structure and for the detection of malformations that may occur during early development. This study was carried out in order to evaluate and describe the normal osteological development of the vertebral column and caudal complex of this species grown under controlled conditions. For this, a total of 540 larvae of L. guttatus, between 2.1 and 17.5mm of total length (TL), were cultured during 36 days; culture conditions were 28ºC, 5.74mg/L oxygen and 32.2ups salinity with standard feeding rates. To detect growth changes, a sample of 15 organisms was daily taken from day one until day 36 of post-hatch (DPH). Samples were processed following standard techniques of clearing, and cartilage (alcian blue) and bone staining (alizarin red). Results showed that the vertebral column is composed of ten vertebrae in the abdominal region, and 14 vertebrae including the urostyle in the caudal region. The development of the axial skeleton starts with the neural arches and haemal arches at 3.8mm TL. Caudal elements such as the hypurals and parahypural began to develop at 4.1mm TL. Pre-flexion and flexion of the notochord and the formation of all hypurals were observed between 5.3 and 5.8mm TL. Ossification of the vertebrae in the abdominal region and in some neural arches initiated at 9.5mm TL. In the caudal region, all the neural and haemal arches ossified at 10.2mm TL. All the abdominal vertebrae and their respective neural arches and parapophyses ossified at 11.2mm TL, while the elements of the caudal complex that ossified were the hypurals, parahypurals and modified haemal spines. All caudal fin rays, 12 neural spines and 3 haemal arches were ossified by 15.5mm. The complete ossification process of this specie under laboratory culture conditions was observed when larvae reached 17.3mm TL on 36 DPH. Detailed analysis of the osteological structures will allow a reference description to evaluate and detect malformations that may occur during the larval culture of the spotted rose snapper.

El pargo flamenco (Lutjanus guttatus) es una especie de importancia comercial en México con un gran potencial para su cultivo. El estudio osteológico en estadios tempranos de esta especie bajo condiciones controladas, es una herramienta importante para el conocimiento de su estructura ósea normal y poder detectar las malformaciones que se puedan presentar. El objetivo del presente trabajo se realizó para conocer y describir el desarrollo osteológico normal de la columna vertebral y el complejo caudal de 540 larvas de 2.1 a 17.5mm de longitud total (LT) bajo condiciones de cultivo a 28°C, 5.74mg/L de oxígeno y 32.2UPS de salinidad. Diariamente se tomó una muestra de 15 organismos desde el día uno hasta el 36 después de la eclosión (DDE) y se procesaron con las técnicas de clareado y tinción de cartílago (azul aciano) y hueso (rojo alizarina) para llevar a cabo la descripción de las estructuras. La columna vertebral se divide en región abdominal con diez vértebras y región caudal compuesta por 14 vértebras incluido el urostilo. El desarrollo del esqueleto axial inicia con la formación de los arcos neurales y hemales a los 3.8mm de LT. A los 4.1mm de LT empieza la formación de los hipurales y parahipural que son elementos caudales. Entre los 5.3 y 5.8mm de LT se observó en pre-flexión y flexión del notocordio y la formación de todos los hipurales. La osificación de las vértebras en la región abdominal y en algunos arcos neurales inició a los 9.5mm de LT. A los 10.2mm de LT se osificó la región caudal y todos los arcos neurales y hemales. A los 11.2mm LT se osificaron todas las vértebras abdominales con sus respectivos arcos neurales y los parapófisis, mientras que los elementos del esqueleto caudal que se osificaron fueron los hipurales, parahipurales y las espinas hemales modificadas. A los 15.5mm de LT se osificaron los radios de la aleta caudal y 12 espinas neurales y 3 hemales. El proceso de osificación de las larvas de esta especie en condiciones de cultivo se completó a los 17.3mm LT o 36 DDE. El análisis detallado de las estructuras osteológicas, permitirá una descripción de referencia para evaluar y detectar las malformaciones que se puedan presentar durante el cultivo larvario.

Desarrollo embrionario del pargo colorado Lutjanus colorado (Jordan & Gilbert, 1882) / Embryonic development of pargo colorado Lutjanus colorado (Jordan & Gilbert, 1882)

El pargo colorado (Lutjanus colorado) es una especie con un alto valor comercial en el mercado mexicano, con potencial para su cultivo. Hasta la fecha no existen estudios sobre su reproducción, cultivo larvario y engorda en cautiverio. El presente trabajo es el primer reporte sobre la descripción a detalle del desarrollo embrionario de la especie bajo condiciones de cultivo. Los huevos fertilizados viables del pargo colorado son pelágicos, esféricos, transparentes y con una sola gota de aceite. Midieron 0,77±0,09 mm de diámetro y la gota de aceite 0,14±0,01 mm. La primera división ocurrió a las 0,05 horas post fertilización (HPF). La eclosión se llevó a cabo a las 17,22 HPF bajo las condiciones del presente estudio. Las larvas recién eclosionadas midieron 1,8±0,1 mm de longitud total (LT). El desarrollo embrionario de esta especie fue similar a la descrita para especies de la misma familia. Los resultados del presente estudio aportan información básica para iniciar el desarrollo de la biotecnología para la producción de semilla de esta especie a escala comercial.

The Colorado snapper (Lutjanus colorado) is one of the most commercially important fish species in México and it is considered a suitable candidate for culture. Until now, no research has been carried out on its reproduction, larviculture and fattening in captivity. This study is the first description of embryonic development of this species under controlled conditions. Fertilized eggs of Colorado snapper are pelagic, spherical and transparent and contain one drop of oil. Eggs measured 0.77±0.09 mm and the drop of oil 0.14±0.01 mm. First cell division occurred at 0.05 h post-fertilization (HPF), hatching at 17.22 HPF under the above described conditions. Larvae total length (LT) was 1.8±0.1 mm. Embryonic development of this species was similar to other lutjanidae species. These results provide basic information for developing the necessary biotechnology for commercial seed production of the Colorado snapper.

Los cromosomas mitóticos y meióticos del pez tropical Petenia splendida (Cichlidae)

The mitotic and meiotic chromosomes of the tropical fish Petenia splendida (Cichlidae). The karyotype of bay snook, Petenia splendida, is described based on mitotic and meiotic stages of sixty larvae and twelve juveniles from Tabasco, Mexico. Standard cytological procedures with minor modifications were followed to obtain mitotic and meiotic chromosome spreads. One hundred chromosome slides were analyzed and 290 chromosome spreads were counted. High-quality spreads in mitosis and meiosis were used for karyotype analysis. Mitotic chromosome spreads showed 76.7 % of such cells with 2n=48 chromosomes, while meiotic spreads revealed 55.2 % with 24 chromosomes in haploid stage. Photographic documentation of eight highquality pictures showed that the karyotype consists of three pairs of bi-armed metacentric-submetacentric chromosomes (msm) and 21 pairs with uni-armed subtelocentric-acrocentric chromosomes (sta), with a fundamental number (FN) of 54 arms. Karyotype chromosomes were verified by analysis of haploid and diploid metaphases at meiotic stage I. Abundant chromosome spreads were observed more frequently on slides from larvae. No evidence of heteromorphism to discriminate sexual chromosomes was detected. There were "dot-like" chromatic bodies in both sexes and they were classified as "B" chromosomes. The karyotype of P. splendida is type "A", i.e. primitive in the Cichlid family, similar to other species of Cichlasoma. The occurrence of supernumerary chromosomes is still unknown: studies on the effects of pollution and hybridization might be important to understand that phenomenon. Rev. Biol. Trop. 56 (2): 895-907. Epub 2008 June 30.

Para describir los cromosomas del cariotipo en mitosis y meiosis de la mojarra tenguayaca P. splendida, se procesaron 60 larvas y doce jóvenes (seis hembras y seis machos) procedentes de Tabasco, México. Se emplearon los procedimientos citológicos clásicos para peces pequeños y grandes, con algunas modificaciones que permitieron obtener campos cromosómicos en meiosis y mitosis. Analizamos al microscopio 100 laminillas, contando 290 dispersiones cromosómicas. En mitosis, 76.7 % de los conteos dieron número modal diploide de 2N=48 cromosomas, mientras en meiosis el 55.2 % mostró 24 cromosomas en condición haploide. Se analizaron ocho de las mejores fotografías para establecer el cariotipo y se identificaron tres pares de cromosomas birrámeos metacéntricos-submetacéntricos (msm) y 21 pares de cromosomas monorrámeos subtelocéntricos-acrocéntricos (sta) con número fundamental (N.F) de 54 brazos. Se corroboró el cariotipo mediante el análisis de campos cromosómicos en estadio haploide y diploide de la meiosis I. Las dispersiones cromosómicas tuvieron un número mayor en larvas que en jóvenes. No hubo diferencias heteromórficas para distinguir cromosomas sexuales. Sin embargo, se observó la presencia de cuerpos cromáticos en forma de puntos, como una característica propia de los microcromosomas "B". Para esta familia, el cariotipo de P. splendida es primitivo o tipo "A"; y es estrechamente parecido al del género Cichlasoma. El origen de los cromosomas supernumerarios es un fenómeno aun desconocido en los cíclidos por lo que faltan estudios relacionados con el daño causado por la contaminación y la hibridación.